[QPCR,荧光定量PCR,实时定时PCR,求助]QPCR的时候为什么用Sybgreen跑出的带不是很准确?直接胶里面加EB条带是正确的?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/04 00:44:25
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Sybgreen本身是一种多肽类物质,结合在DNA双螺旋的小沟里,可能会造成拖带啊之类的情况,所以不是很准。但是用也没有问题。
EB的分子量很小,所以会比较准。
实时荧光定量PCR的原理是在反应体系中加入Sybgreen,只要有双螺旋生成,Sybgreen结合上去就会发光,对发光的强度定量,就可以实时监控PCR过程。
Sybgreen对于双螺旋的结合是非特异性的,所以用Sy...
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Sybgreen本身是一种多肽类物质,结合在DNA双螺旋的小沟里,可能会造成拖带啊之类的情况,所以不是很准。但是用也没有问题。
EB的分子量很小,所以会比较准。
实时荧光定量PCR的原理是在反应体系中加入Sybgreen,只要有双螺旋生成,Sybgreen结合上去就会发光,对发光的强度定量,就可以实时监控PCR过程。
Sybgreen对于双螺旋的结合是非特异性的,所以用Sybgreen法定量,误差比较大,非特异性扩增啊引物二聚体啊什么的都会造成误差。tagman探针法比较好一些,特异性好,定量准,但是贵。原理就是在扩增的区域段内设计一段互补的DNA探针,一头连上荧光基团,一头连上淬灭基团,在PCR过程中,酶的外切酶活性会切开DNA探针,两个基团就分离了,荧光基团就可以发光。
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