细菌DNA浓度如何换算为DNA拷贝数?标准菌株提取的细菌DNA浓度后,如何换算成DNA拷贝数,以制作荧光定量PCR的标准曲线!?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/05 19:35:37
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细菌DNA浓度如何换算为DNA拷贝数?标准菌株提取的细菌DNA浓度后,如何换算成DNA拷贝数,以制作荧光定量PCR的标准曲线!?
细菌DNA浓度如何换算为DNA拷贝数?
标准菌株提取的细菌DNA浓度后,如何换算成DNA拷贝数,以制作荧光定量PCR的标准曲线!?
细菌DNA浓度如何换算为DNA拷贝数?标准菌株提取的细菌DNA浓度后,如何换算成DNA拷贝数,以制作荧光定量PCR的标准曲线!?
需要知道DNA浓度、DNA片段长度.即可换算成拷贝数
1A260 吸光度值=ds DNA 50 ug/ml=ss DNA 33 ug/ml=ss RNA 40 ug/ml
核酸浓度=(OD260) x (dilution factor) x [33 或40或50]= ng/ul
MW 代表 克/摩尔,单位dolton:1dolton即表示 1g/mol
1 摩尔= 6.02 x 10(23)次摩尔分子(拷贝数)
平均分子量(MW):
dsDNA=(碱基数) x (660 道尔顿/碱基)
ssDNA=(碱基数) x (330 道尔顿/碱基)
ssRNA=(碱基数) x (340 道尔顿/碱基)
得到拷贝数计算公式:
(6.02 x 10(23)次拷贝数/摩尔) x (浓度) / (MW g/mol) = copies/ml.
即:
(6.02 x 10(23)) x (g/ml) / (DNA length x 660) = copies/ml.
或
(6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul.
总之,如果DNA/RNA的量是ng/ul,那么拷贝数(copies/ul)=[(ng数×10的-9次方)×(6.02×10的23次方)]÷(碱基数×345)
例:
3000 碱基质粒,浓度100 ng/ul ,MW= 3000 bp x 660 dalton/bp =1.98 x 10(6) daltons,即1 mol =1.98 x 10(6) g.
[ 100ng x 10(-9) ] g / 1.98 x 10(6) = 摩尔数 copy数= 摩尔数 x 6.02 x 10(23)= 3x 10(10) copies/ul.